肿瘤动物模型的建立

将对数生长的肿瘤细胞收集, 用无血清基质 10.0ml, 于 1500 转/分, 离心3min, 连续洗 3 次, 最后用无血清基质混匀, 用血球计数器计算肿瘤细胞数量(平均 5 个中方格的细胞计数×1000444即是肿瘤数/毫升)。 计算完肿瘤细胞总数, 再将肿瘤细胞密度调至 4×106 个/ml, 每只小鼠腋下接种 50ul(即 2×105 个肿瘤细胞), 2周左右可扪及肿瘤小节结。一般选取 6—8 周的小鼠，不同的肿瘤细胞接种的数量和动物不一样, 比如 LL/2, B16, Hep? 可接种 C57 和 BALB/C 小鼠, NS-1, EL-4, C26, Meth A 可接种 BALB/C 小鼠, H22 接种昆明鼠。从肿瘤接种后可扪及小结节开始, 每 3 天用游标卡尺量肿瘤纵横大小(单位: mm), 至少连续一个月时间。注意要设计不同的实验组和对照组, 每组动物数一般为 5—10 只, 一般接种肿瘤6—8 周后，小鼠的肿瘤可生长至直径为 15—20mm (即小鼠会濒临死亡)时, 可眼球取血，分离血清并保存血清, 处死小鼠, 取肿瘤组织照相, 取部分肿瘤组织作冰冻组织切片(或-80℃ 保存), 作相应的免疫组织化学染色 , 取部分肿瘤组织用3%中性的甲醛固定, 石腊包埋, 作常规 HE 染色.

小鼠尾静脉注射方法

在靠近实验台边缘处, 用大培养皿扣住小鼠, 左手抓住小鼠尾巴, 用酒精棉球擦尾巴, 可见到两侧静脉; 注射前应确认针管内无气泡, 注射时由尾尖开始,顺向刺入。失败后再逐渐移向根部重刺, 若准确刺入静脉内, 推进时无阻力, 一般可注入 0.1—0.5ml。

肿瘤蛋白疫苗预防性动物实验

一般肿瘤蛋白疫苗首次免疫剂量 10ug/只小鼠, 与相应佐剂混匀, 在背部皮下注射, 第 2 次免疫间隔 2 周, 同样加佐剂在皮下注射；第 3 次免疫间隔 2 周, 同样加佐剂在皮下注射；第3 次免疫后 2 周, 用 ELISA 检测其血清效价，当效价达到要求时；在接种肿瘤细胞前 3 天,于腹腔或尾静脉加强注射 20ug /只。