wistDx 的重组酶聚合酶扩增（RPA）将彻底改变在资源有限的现场环境中扩增和检测核酸的能力。

RPA 技术原理

RPA 体系的重点是重组酶，这些酶与寡核苷酸引物形成复合体，并使引物与双链 DNA 中的同源序列配对。单链 DNA 结合（SSB）蛋白与被取代的 DNA 链结合，并使形成的 D 环保持稳定。然后从引物启动由聚合酶介导的 DNA 扩增，但前提是存在靶标序列。一旦启动，扩增反应将快速进行，因此开始时只需一点靶标 DNA 拷贝数，高特异性 DNA 扩增在数分钟内即可达到可检出水平。

RPA 循环
 

RPA 的技术特点

为什么选择 RPA 方法?

◇ 速度

RPA 非常快速，在 37～42 °C 这一通常最适宜的反应温度下，只需少量核酸分子即可在 3～10 分钟（通常）内扩增至可检出水平，但这将取决于靶标大小。在大部分情况下，只需要一个人即可在半小时内采集样本、制备样本、运行检测并取得结果，并且无需专业培训。

◇ 灵敏度

RPA 可检测复合样本中的单拷贝 DNA 和 10 拷贝甚至更少 RNA，而无需预先纯化核酸。

◇ 特异性

RPA 具有高度特异性，该技术可从可能含有数百纳克来自多个不同物种的不相关复合基因组 DNA（包括人 DNA）的样本中识别并扩增单个 DNA 分子，抗干扰能力强。

◇ 恒温运行

RPA 在恒定的低温（37～42 °C 最适宜）下运行。对于某些应用，如果需要，即便体温也可支持 RPA 扩增。该反应在偏离温度及低温设置下也表现稳健，即使在常规室温 25 °C 下也将奏效，虽然反应速度会下降; 在此温度下，只要此生物化学过程被正确配置，仍可在一小时内获得结果。

◇ 样本容差

RPA 对样本类型的要求宽松，有时可直接检测未经核酸纯化的原始样本，例如血液、鼻拭子或培养基。通常，只需采用基本的病原体裂解方法处理样本以释放核酸即可，例如热处理或弱碱处理。每种检测所需的最合适的样本制备方法取决于病原体滴定度、是否存在抑制剂以及裂解要求等因素，并将需要设计到检测程序中。RPA 对某些复合样本类型的宽容性使该技术非常适合广泛的现场实地应用。

◇ 广泛的适用性

RPA 能够方便地应用于任何 DNA 或 RNA 靶标，无序列偏好性，这一点对于 NGS 尤其重要。如果将逆转录酶添加到反应混合液中开发出了超高灵敏度的 RNA 一步检测法。

◇ 多重检测

通过将多种引物同时添加到同一反应管中，单次 RPA 测试即可扩增和检测多种不同的靶标。

◇ 低设备成本

RPA 仅需要基本的检测设备，也就是说，最终用户可以使用 RPA 技术开发出适合各种应用和环境的人性化诊断方法和试剂盒。

◇ 灵活的试剂形态

核心反应组分能够以稳定的干燥形态供货，该形态易于运输，且无需冷藏即可储存最多 12 个月（稳定性可能因用途不同而有变化，因此仍建议在冷藏条件下长期储存），也能够以 PCR 试剂更常见的液体形态供货，该形态允许用户针对特定的应用改变反应体积和组分比例。

◇ 多种检测形式

RPA 可应用于各种检测系统和仪器，包括实时荧光探针和夹心法等形式。

RPA 与 其他核酸扩增方法 PCR 及 LAMP 的比较

产品系列
 

TwistAmp^® 试剂盒（随附冻干试剂）的试剂形态具有高度便利性，非常适合在现场、床边等环境中使用，而且特别适用于无法维持冷链的情况下。TwistAmp^® 研究试剂盒包含使用最终用户设计的特定引物进行核酸扩增时所需的所有试剂。

包含冻干试剂的 TwistAmp^® 试剂盒具有以下优势：

* RPA 扩增温度要求低，允许使用低成本、便于携带的检验设备。

* 干 RPA 试剂足够稳定，可以在室温下运输。

* 允许多种「适宜现场的」检测输出技术，例如侧向层析技术和荧光技术。

* RPA 对一些复杂样本类型表现出高度稳健性（即样本耐受性），更适合于许多不同的现场实地应用。

除了在现场实地使用中的优势，通过 TwistAmp^® 试剂盒还便于为许多应用和用途开发出快速、特异且灵敏的 DNA 和 RNA 检测方法。

TwistAmp^® Basic 试剂盒可实现 DNA 扩增。包含 DNA 扩增所需的所有酶和试剂，用户只需提供引物和模板。使用 TwistAmp^® Basic 时，即使 PCR 引物也有效。TwistAmp^® Basic 已被用于固相、加尾引物、配基、电化学和微阵列等应用。

非常适用于：终点凝胶电泳 DNA 检测、下游应用（例如亚克隆）
 

TwistAmp^® exo 试剂盒可实现实时荧光 DNA 扩增。若想要以均相形式将 TwistDx RPA 扩增技术与 TwistDx 专利荧光 TwistAmp^® exo 探针结合使用，则推荐使用本产品。用户只需提供引物、探针和模板。更多信息请参阅手册。

非常适用于：实时荧光 DNA 检测
 

TwistAmp^® nfo 试剂盒可实现横向流动检测用 DNA 扩增。若想要通过终点夹心法（例如横向流动 [LF] 试纸条）检测有效 DNA 扩增反应的产物，则适合使用本产品。用户只需提供引物、探针和模板。

非常适用于：开发低成本的现场侧向层析检测方法。
 

TwistAmp^® Liquid 是为了提供散装液体形态的核心 RPA 组分，最终用户能够以不同的比例混合这些组分，以便用户为各自的应用配制预混液*。

TwistAmp^® Liquid 具有以下优势：

最终用户可自由调整预混液制备量，而不再被局限于冻干试剂的固定体积

最终用户可自由调整反应体系中的组分比例，这使 RPA 试验开发工作具有更大的灵活性

TwistAmp^® Liquid Basic 是一款最适合用于凝胶分析或者作固相、加尾引物、适配体、电化学和微阵列应用的 DNA 扩增试剂盒。

TwistAmp^® Liquid exo 是一款用于以实时荧光检测扩增反应的 DNA 扩增试剂盒。
 

以灵活的液体形态实现 DNA 扩增。包含 DNA 扩增所需的所有酶和试剂，用户只需提供引物、dNTP 和模板。更多信息请参阅手册。

非常适用于：终点凝胶电泳 DNA 检测、下游应用（例如亚克隆）、便于使用不同的 RPA 反应体积或改变组分比例
 

以灵活的液体形态进行实时荧光 DNA 扩增。若想要将 RPA 与 TwistDx 专利荧光 TwistAmp^® exo 探针结合使用，则推荐使用本产品。除了基本的组分，还包含强大的核酸酶 （核酸外切酶 I），该酶将在扩增反应期间处理 TwistAmp^® exo 探针并产生实时读出。用户只需提供引物、探针、dNTP 和模板。

非常适用于：实时荧光 DNA 检测，便于使用不同的 RPA 反应体积或改变组分比例

公司背景

TwistDx Inc. 由分子生物学家兼蛋白生物化学家 Niall Armes 博士以及 Derek Stemple 博士和 Nagesh Mahanthappa 博士于 1999 年共同创立，其总部位于美国马萨诸塞州剑桥市。TwistDx Limited 于 2002 年成立，其公司位于英国剑桥，2010 年被 IVD 行业 POCT 巨头美艾利尔 Alere 收购，Alere 在 2017 年 4 月被雅培 Abbott 收购。

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• TwistAmp^® Liquid exo

• TwistAmp^® Liquid Basic

• Twist Amp^® Liquid 研发试剂盒

• TwistAmp^® nfo

• TwistAmp^® exo

• TwistAmp^® Basic

• TwistAmp^® 冻干研发试剂盒