大肠杆菌自诱导培养基

产品介绍 

大肠杆菌自诱导培养基（E.coliAuto-Indection Medium）是在LB培养基的基础上进行改进优化配方，可用于lac调控表达的大肠杆 菌菌株培养及蛋白表达。含有多种营养物质并额外添加微量元素、氨基酸等，碳源梯度设计既能满足菌体生长需求，同时能实现外源蛋白 在细菌达到饱和生长期后的自动诱发。同等产量相比传统LB使用更少培养体积，免去了密切监控菌液密度的过程，且无需额外添加IPTG。 本品同样适用于多克隆表达，高通量筛选。 产品为粉末A加液体B组合形式，配制方便。 

载体和细菌菌株 

大肠杆菌自诱导培养基适用于由功能性的lac操纵子（包括lacY和lacZ）控制的表达系统，如pET系列。表达菌种可用BL21 (DE3) 。

核心成分

1 碳源梯度设计：甘露醇→乳糖/甘油（诱导碳源）的代谢切换，触发基因表达。
2 诱导信号分子：乳糖代谢产物作为天然诱导剂I（替代IPTG），更温和高效。
3 营养配方优化：氮源、微量元素等协同支持高密度发酵。

使用方法 

1 培养基的配制  

1) 将整包组分A倒入摇瓶中，加入975ml纯水，121℃灭菌20min;

2) 冷却至37℃后，在无菌环境中加入抗生素（依据载体中的抗性基因，如100ug/ml氨苄青霉素），最后加入25ml的组分B，并混合均匀。

2 培养基的使用 

方案一 

1) 将构建好的质粒转化入细菌，如BL21(DE3)，涂布于自备的LB固体培养基（含抗生素），37℃培养过夜； 

2) 培养体积小于100ml时，直接挑取单克隆菌落至自诱导培养基（含抗生素）中，37℃培养过夜； 

3) 培养体积大于100ml时，挑取单克隆菌落接种到自备的液体LB培养基（含抗生素）中，37℃培养6-8h； 

4) 将所得菌液按百分之一的体积比例加入自诱导培养基（含抗生素）中（例：自诱导培养基体积是1000ml，则加入10ml 菌液）； 

5) 37℃培养18-24h，摇床转速大于180rpm/min； 

6) 收集菌体，检测目的蛋白表达情况。

方案二 

对于在低于30℃条件下表达的蛋白需使用双温度培养条件，有些蛋白需在18或25℃表达可提高蛋白溶解度和降低细胞毒性。 

1) 第一天，接种菌种至2-10mlLB培养基（含抗生素），在30℃，180rpm/min培养过夜，同时将需使用的自诱导培养基（含抗生素） 在30℃过夜预热； 

2) 第二天，将种子液按1：40的比例接种至预热的自诱导培养基中； 

3) 在30℃，180rpm/min培养6h，然后将培养瓶转移至18或25℃，180rpm/min培养24-36h；

4) 第三-四天，收集菌体，检测目的蛋白表达情况。 

3 菌种裂解 

菌种培养结束后，培养基离心去掉上清收集沉淀菌泥，对菌体进行称重，记录重量。进行后续裂解纯化步骤。菌泥可用物理破碎法如 超声、高压匀浆等，或化学方法破碎。化学方法裂解菌泥推荐使用本公司飞刀TM快速裂菌试剂盒（CutE.coilLysisKit）或铁锤超级裂菌液。 

1) 飞刀TM快速裂菌试剂盒（CutE.coilLysisKit）使用方法：按照1：9（m：V）加入重选液重悬菌体，按照菌体重悬液体积的1/9加 入飞刀TM快速裂菌试剂盒A液，搅拌均匀后室温裂解5-10min，再加入混合液1/1000体积的B液，搅拌均匀后4-25℃消化核酸5-10min； 

2) 铁锤超级裂菌液使用方法：按照1：9（m：V）加入重悬液重悬菌体。按照菌体重悬液体积的1/9加入铁锤超级裂菌液，搅拌或振荡 混合均匀，置于 4-25℃条件下裂解1-10min；

产品优势

1 操作便捷免去手动诱导步骤，减少人为误差
2 高产高效延长蛋白表达时间，提升产量（优其对毒性蛋白友好）
3 成本可控省去IPTG等诱导剂费用，适合大规模生产

性能展示

注意事项 

1) 高压灭菌后，培养基的颜色可能会加深，这是正常现象，不会影响产品性能； 

2) 未使用完的培养基可在4℃保存一个月； 

3) 由于本方法所得菌液密度大，故需要大量氧气，因此培养基的体积不能超过三角瓶的五分之一； 

4) 三角瓶底最好是皱褶式的，这样摇晃中氧气供应更充分； 

5) 为了您的安全和健康，实验过程中请穿实验服并戴一次性手套进行操作； 

6) 本产品仅限科研使用。