DiIC18(3)-DS 细胞膜橙红色荧光探针

【温馨提示】：见我司整理的细胞膜荧光探针（Tracers for Membrane Labeling）产品专题 。

产品简介：

 DiIC18(3)-DS是DiI（DiIC18(3), Cat#：NBS5129）的磺酸化衍生物，具有更好的水溶性，且在固定和透化处理后能维持良好的染色状态。

DiIC18(3)-DS是橙色荧光和亲脂性碳菁类染料-DiI（DiIC18(3)）的类似物，英文全名：1,1'-Dioctadecyl-3,3,3',3'- Tetramethylindocarbocyanine-5,5'-Disulfonic Acid，包含磺酸基团以改进探针的水溶性。在水中呈弱荧光，插入膜内则呈强荧光且相当稳定。在脂质环境内具极其高的摩尔吸光系数和短的激发态寿命（~1ns）。一旦进入细胞后，在细胞内质膜中逐步扩散，于最佳浓度条件下可将整个细胞均匀染色。

保存条件: 

-20ºC干燥避光保存，有效期至少一年。

产品使用：

【注意】以下使用方法仅用作参考，可根据具体的实验条件做出调整。

1. 染色液制备

1）储存液制备：用DMSO配置浓度1～5 mM的储存液。例如，取5mgDiIC18(3)-DS（Mw：993.53g/mol）溶于1ml无水DMSO中，充分溶解，即得到5mM的储存液。【注意】未使用的储存液根据单次用量分装储存在-20℃，避免反复冻融。

2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，调整到1～5 μM的工作浓度。【注意】工作液最终浓度需要根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度开始，以10倍范围为区间进行最优浓度的摸索。

2.悬浮细胞染色

1）加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×10⁶/mL。

2）37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化以保证得到均一化的标记结果。

3）孵育结束，按1000～1500 rpm离心5min。

4）去除上清液，之后轻柔加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。

5）再重复3），4）步骤两次。

3.贴壁细胞染色

1）将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。

2）从培养基中移走盖玻片，滤掉过量培养液，将盖玻片放在潮湿的小室内。

3）在盖玻片的一角加入100μL的染色工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。

4）37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化以保证得到均一化的标记结果。

5）吸掉染色工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10min，然后吸走培养基。

4.显微镜检测

1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiA滤光器的选择参见下表：

2）多色染料的同时检测，滤光器按照以下设定：

a)DiI和DiO＝OmegaXF52，Chroma51004；

b)DiI和DiD＝OmegaXF92，Chroma51007；

c)DiI，DiO和DiD＝OmegaXF93，Chroma61005；

5.流式细胞仪检测

经DiO，DiI，DiD和DiR染色的细胞分别用流式细胞仪的FL1，FL2，FL3或FL4通道检测。

注意事项：

1.      经碳菁类染料（比如DiR）染色后的细胞能用多聚甲醛（PFA）固定，但不能用甲醇或其他溶剂的固定剂。染色能承受0.1% Triton X-100或0.1%毛地黄皂苷的透化处理，但会明显增强胞内染色。

2.      经碳菁类染料（比如DiR）染色后的细胞不建议使用封片剂，因封片剂内的甘油或有机溶剂会溶解染料，引起增加的胞内染色和随时间增加的高背景。建议直接在PBS或其他生理缓冲液内成像。使用PBS直接盖上盖玻片，然后四周用指甲油密封。

3.      荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

4.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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