Tetramethylrhodamine Ethyl Ester (TMRE)

 【温馨提示】：见我司整理的膜电位荧光探针产品专题。

产品简介：

带正电荷的罗丹明染料（比如罗丹明酯）选择性定位在线粒体，因此，普遍用来标记活细胞线粒体。除了选择性标记线粒体外，与JC-1一样，四甲基罗丹明乙酯（Tetramethylrhodamine Ethyl Ester,TMRE）广泛用来测定线粒体膜电位。TMRE在细胞膜不会形成聚集物，与膜蛋白的相互作用非常小。因此，该染料的跨膜分布与膜电位直接相关。TMRE的光谱特性类似于TRITC，使用起来相当方便。

产品特性:

1） CAS NO.：115532-52-0

2） 化学名：3,6-bis(dimethylamino)-9-[2-(ethoxycarbonyl)phenyl]-xanthylium, perchlorate

3） 同义名：Tetramethylrhodamine ethyl ester perchlorate 四甲基罗丹明乙酯高氯酸盐；TMR ethyl ester TMR乙酯；

4） 分子式：C26H27ClN2O7

5） 分子量：514.95

6） Ex/Em：549/574nm

7） 纯度：≥95%

8） 溶解性：溶于DMSO

9）化学结构图：

保存条件: 

-20℃避光干燥保存，至少一年有效。 

产品使用：

1.储存液制备

1.1将低温保存的产品置于室温回温至少20min（此步非常重要，请勿忽略操作），低速离心片刻使粉末沉至管底。

1.2对于25mg粉末，往瓶内加入4.8548ml高质量无水DMSO配制成10mM储存液；由于TMRE的使用浓度比较低，可再配制一个中间储存浓度（比如：100μM），比如：取10μl TMRE（10mM）加入990μl DMSO，充分混匀后，即得到100μM的中间储存浓度。

2.工作液制备

于正式实验前，用无血清细胞培养基稀释母液到适宜的工作浓度，比如：100nM。根据不同的实验用途和细胞类型，TMRE的工作浓度范围一般在20nM~1000nM，初次使用务必优化获得最佳工作浓度。工作液需现配现用。

3.染色步骤（以荧光成像为例）

注①：对于荧光成像分析，常用的TMRE工作浓度范围是50-200nM。

注②：如果需测定某药物对膜电位的作用，需提前处理细胞，再用探针进行后续检测。同时需要设置药物未处理组和药物处理组。

注③：如果需要阳性对照，可选择FCCP或CCCP，这两种化合物都是解偶联剂，能够降低线粒体膜电位，从而防止TMRE染色。

3.1 培养细胞。

3.2去除培养基，用生理缓冲液比如PBS清洗1-2次。

3.3 加入新鲜配好的工作液完全覆盖细胞。

3.4于37℃避光孵育15~45min。

3.5【可选】为了增高灵敏度，用PBS或类似缓冲液清洗细胞1~2次。

3.6 荧光显微镜或共聚焦显微镜进行成像分析。

染色示例（来自文献）

TMRE fluorescence decay upon FCCP treatment and the effect on (Ca²⁺)c.

(A) The representative micrographs showing a decay in TMRE fluorescence in a single cell after 30 s depolarization with 1 µM FCCP. Scale bar 10 µm.

(B) Representative traces showing average FCCP-induced Fura-2 fluorescence increase due to release of mitochondrial Ca²⁺ in n = 15, n = 20, n = 19 cells for C, _2, _3 lines, respectively.

(C) Representative traces of average Fura-2 fluorescence showing lack of 6 µM oligomycin effect on (Ca²⁺)c in 14 cells.

注意事项：

1.      TMRE适合活细胞染色，但不适合固定细胞染色。

2.      荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

3.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

相关产品：