Tetramethylrhodamine Methyl Ester (TMRM)

【温馨提示】：见我司整理的膜电位荧光探针产品专题。

产品简介：

带正电荷的罗丹明染料（比如罗丹明酯）选择性定位在线粒体，因此，普遍用来标记活细胞线粒体。除了选择性标记线粒体外，与JC-1一样，四甲基罗丹明甲酯（Tetramethylrhodamine Methyl Ester,TMRM）广泛用来测定线粒体膜电位。TMRM具细胞膜渗透性，聚集在活线粒体（完整膜电位）上。如果细胞健康且线粒体发挥功能，发出明亮的荧光信号。一旦线粒体膜电位丧失，TMRM不再累积，荧光信号减弱或消失。TMRM信号可用荧光显微镜、流式细胞仪、细胞分选、高通量筛选和高内涵细胞成像分析进行检测。       

TMRM具有以下特征：①适用于线粒体膜电位的活细胞动态学研究，不适用于固定细胞。②可用RFP/TRITC滤片设置观察，最大激发和发射波长是548/574nm。③与绿色、深红色、紫色和蓝色发射探针兼容，比如：GFP、DAPI、Hoechst，Lysotracker deep red，做多重染色。

产品特性:

1） CAS NO.：115532-50-8

2） 化学名：3,6-bis(dimethylamino)-9-[2-(methoxycarbonyl)phenyl]-xanthylium, perchlorate

3） 同义名：Tetramethylrhodamine methyl ester, perchlorate 四甲基罗丹明甲酯高氯酸盐；TMR methyl ester TMR甲酯；

4） 分子式：C25H25ClN2O7

5） 分子量：500.93

6） Ex/Em：549/574nm

7） 纯度：≥95%

8） 溶解性：溶于DMSO

9）化学结构图：

保存条件: 

-20℃避光干燥保存，至少一年有效。 

产品使用：

1.储存液制备

1.1将低温保存的产品置于室温回温至少20min（此步非常重要，请勿忽略操作），低速离心片刻使粉末沉至管底。

1.2对于25mg粉末，往瓶内加入5ml高质量无水DMSO配制成10mM储存液；由于TMRM的使用浓度比较低，可再配制一个中间储存浓度（比如：100μM），比如：取10μl TMRM（10mM）加入990μl DMSO，充分混匀后，即得到100μM的中间储存浓度。

2.工作液制备

于正式实验前，用无血清细胞培养基稀释母液到适宜的工作浓度，比如：100nM。根据不同的实验用途和细胞类型，TMRM的工作浓度范围一般在20nM~1000nM，初次使用务必优化获得最佳工作浓度。工作液需现配现用。

3.染色步骤（以荧光成像为例）

注①：对于荧光成像分析，常用的TMRM工作浓度范围是50-200nM。

注②：如果需测定某药物对膜电位的作用，需提前处理细胞，再用探针进行后续检测。同时需要设置药物未处理组和药物处理组。

注③：如果需要阳性对照，可选择FCCP或CCCP，这两种化合物都是解偶联剂，能够降低线粒体膜电位，从而防止TMRM染色。

3.1 培养细胞。

3.2去除培养基，用生理缓冲液比如PBS清洗1-2次。

3.3 加入新鲜配好的工作液完全覆盖细胞。

3.4于37℃避光孵育15~45min。

3.5【可选】为了增高灵敏度，用PBS或类似缓冲液清洗细胞1~2次。

3.6荧光成像。对于荧光显微镜，用能够观察Ex/Em=548/573nm的滤片来进行观察。

染色示例：

Ref：

Figure 1. Assessment of mitochondrial membrane potential and ROS levels in live rat cortical neurons. (A) Representative fluorescence image of cortical neurons loaded with TMRM. After scanning the baseline TMRM fluorescence, neurons were treated with the protonophore FCCP (1 μM). To the right is a pseudocolor intensity bar of TMRM fluorescence with bright yellow and black representing maximum and minimum intensity, respectively. The loss of TMRM fluorescence from the mitochondrial regions indicates the collapse of ΔΨm upon FCCP treatment (panel B). The quantitative representation of change in TMRM fluorescence intensity at different time points before and after FCCP treatment is shown in panel C. 

注意事项：

1.      荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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