Indo-1, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针，超级纯（95%）

【温馨提示】：见我司整理的钙离子载体/探针（Calcium ionophores/indicators）产品专题。

【务必注意】：初次使用离子探针的用户，强烈建议配合：Pluronic F-127, Cell Culture Tested 细胞培养级（NBS2009-1g）一起使用，以提高探针的水溶性和胞内加载性。 

产品简介：

Indo-1是一种常用的紫外光激发和比率测定型Ca²⁺荧光探针。一旦与Ca²⁺结合后，Indo-1的最大发射波长向短波长迁移，由原来的475nm（Ca²⁺-free）迁移到401nm（Ca²⁺-saturated），而最大激发波长无明显变化，维持在346nm~330nm范围内，适宜用氩离子激发器的UV激发光谱（351~364nm）进行荧光激活。因此，不同于Fura-2，Indo-1是发射波长率图Ca²⁺荧光探针，特别适合流式细胞仪检测，因其可在控制单一激发波长的条件下轻易调整发射滤片，也特别适合多色荧光检测。使用发射波长下荧光强度的比率来测定细胞内Ca²⁺浓度，可消除不同细胞样品间荧光探针装载效率的差异，探针的渗漏，细胞厚度差异等因素导致的检测误差。实际检测，推荐使用最大发射波长分别用405nm和485nm。

Indo-1, AM是Indo-1的一种乙酰甲酯衍生物，具有细胞膜渗透性，只需简单培养，即可轻易进入细胞。一旦进入细胞内，即被其内酯酶剪切生成不具膜渗透性的Indo-1，从而滞留在胞内以发挥相应生理功能。

基本特性：

1） CAS NO：112926-02-0

2） 化学名：1H-Indole-6-carboxylic acid, 2-[4-[bis[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl]amino]-3-[2-[2-[bis[2- [(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl]amino]-5-methylphenoxy]ethoxy]phenyl]-, (acetyloxy)methyl ester

3） 同义名：Indo-1, Acetoxymethyl Ester; Indo-1, AM ester; Indo-1 AM Calcium Sensor Dye;

4） 分子式：C₄₇H₅₁N₃O₂₂

5） 分子量：1009.91

6） 纯度：≥95% (HPLC)

7） 外观：黄色固体

8） 解离常数（Kd）：230nM

9） 消光系数：33000 cm^-1 M^-1

10） Ex/Em：346/475 nm（Ca²⁺-free），330/401 nm（Ca²⁺-saturated）

11） 溶解性：溶于DMSO（1~5mM）

12）化学结构图：

Indo-1, AM激发光谱图

Description： Fluorescence emission spectra of indo-1 (NBS7644) in solutions containing 0–39.8 µM free Ca²⁺. 

保存条件: 

4℃保存（一年有效）

产品使用：

A， 试剂准备

1） 配制Pluronic F-127母液： 称取100mg Pluronic F-127粉末（货号：NBS2009）中加入500μl DMSO，配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存，不用冷藏。如有结晶析出，可以重新加热后溶解，不影响使用。

2） HHBS Buffer (1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.3) 或者其他生理缓冲液

B，操作步骤

1）. Indo-1/AM 储存液的配制 利用高质量无水DMSO溶解Indo-1/AM配制成2-5mM的储存液，该储存液可分装于-20℃避光干燥密封保存，最长可保存6个月，但是避免反复冻融，建议分装保存。每次使用前需回温至室温。

2）. Indo-1/AM 工作液的配制 利用合适缓冲液（如HHBS）将Indo-1/AM稀释成2-20μM的工作液，并添加0.04%PluronicF-127和有机阴离子转运抑制剂probenecid（0.5-1mM）。 【注①】： 对于大多数细胞系，建议最终浓度为4-5 μM的Indo-1/AM。细胞加载所需的指示剂的确切浓度必须根据经验确定。

【注②】： Indo-1/AM工作液需现配现用，避免反复冻存。

【注③】： PluronicF-127 可以防止Indo-1/AM在缓冲液中聚合并能帮助其进入细胞。

3）. 取出预培养的细胞，除去培养基，使用缓冲液洗涤细胞3次。

【注①】：如果使用含血清的培养基，血清中的酯酶会降低Indo-1/AM进入细胞的效果。另外含有酚红的培养基会使本底值略微偏高，所以加工作液之前需尽量去除培养基残留。

4）. 将 Indo-1/AM工作液加入细胞，加入量以覆盖细胞为准。在37℃培养30-60min。

5）. 用缓冲液（如HHBS）洗涤细胞3次，以充分去除残留的Indo-1/AM工作液。然后加入缓冲液覆盖细胞。

6）. 数字成像显微镜检测细胞。

【注①】：某些细胞具有自体荧光会影响结果分析，需使用未加载探针细胞做对照，在结果分析时在同一波长下扣除自荧光。

注意事项：

1.      荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2.      乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。

3.      Indo-1, AM在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可在20-25℃温育片刻至全部融解后使用。

4.      Indo-1, AM第一次使用，建议储存液现配现用，分装成单次用量，严格做到≤-20℃密封干燥冻存，以防止受潮。为了保证良好的实验效果，尽量在短时间内使用。

5.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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