Fura Red, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针

【务必注意】：初次使用离子探针的用户，强烈建议配合：Pluronic F-127, Cell Culture Tested 细胞培养级（NBS2009-1g）一起使用，以提高探针的水溶性和胞内加载性。 

产品简介：

Fura Red是一种可见光激发的Fura-2类似物，提供独特的可能性使其与单波长激发、绿色荧光的钙离子探针（比如：Fluo-8）联合使用时，通过显微光度术、成像或流式细胞术来比率法测定单细胞内的Ca²⁺水平。Fura Red, AM是Fura Red的一种乙酰甲酯衍生物，具有细胞膜渗透性，只需简单培养，即可轻易进入细胞。一旦进入细胞内，即被其内酯酶剪切生成不具膜渗透性的Fura Red，从而滞留在胞内以发挥相应生理功能。Fura Red, AM能够与Fluo-3 AM、Fluo-4 AM、Fluo-8 AM等同时加载进入细胞。两种钙离子探针结合使用的优势在于能用更长的激发波长。这比传统的紫外或近紫外激发的比率型探针对细胞造成更小的伤害，由于可见光波长对细胞的光毒性更小。Fura Red显著的斯托克斯位移使其能与荧光素或荧光素样的染料（使用单一激发波长）进行多色荧光检测。比如，研究者想同时测定单核细胞和粒细胞的钙流和氧化爆发，通过同时分析Fura Red和罗丹名123（二氢罗丹名123的氧化产物）的荧光值来满足目的。Fura Red也能与转染细胞内的蓝色荧光蛋白结合使用。

产品特性：

1）CAS NO：149732-62-7

2）化学名：Glycine, N-[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl]-N-[5-[2-[2-[bis[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl] amino]-5-methylphenoxy]ethoxy]-2-[(5-oxo-2-thioxo-4-imidazolidinylidene)methyl]-6-benzofuranyl]-, (acetyloxy)methyl ester

3）同义名：Fura Red, Acetoxymethyl Ester;

4）分子式：C₄₇H₅₂N₄O₂₄S

5）分子量：1088.99

6）纯度：≥95% (HPLC)

7）最大激发/发射波长：471/652 nm（Ca²⁺-free），436/630 nm（Ca²⁺-bound）

8）溶解性：溶于DMSO（5mM）

9）化学结构图：

保存条件: 

-20℃干燥避光保存，有效期至少1年。 

产品使用：

A， 试剂准备

1） 配制Pluronic F-127母液： 称取100mg Pluronic F-127粉末（货号：NBS2009-1g）中加入500μl DMSO，配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存，不用冷藏。如有结晶析出，可以重新加热后溶解，不影响使用。

2） HHBS Buffer (1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.3) 或者其他生理缓冲液

B，操作步骤

1） 用无水DMSO溶解Fura Red, AM配制成2-5mM的储存液，或将已配好的Fura Red, AM储存液取出于室温回温。（如：若配制成4mM的母液，需向50µg Fura Red, AM中加入11.5µl 无水DMSO）。准备Fura Red, AM工作液之前，有时需要往Fura Red, AM储存液中加入适量的20% Pluronic F-127溶液，以增强AM探针的水溶性。

2） 用HHBS或其他生理缓冲液将 Fura Red, AM+DMSO储存液稀释到1-20µM的工作液。

3）【可选】如果细胞内（比如CHO细胞）含有机阴离子转运体，丙磺舒（Probenecid，1-2.5mM）或磺吡酮（Sulfinpyrazone， 0.1-0.25mM）可能需要加入细胞培养基内，以降低去酯化探针的泄露水平。

4） 将准备好的Fura Red, AM染色工作液加入细胞，加入量以覆盖细胞为准。室温或37℃孵育20-120min。

5） 吸掉染色工作液，并用HHBS或其他生理缓冲液（如有必要，使用含转运体抑制剂如1mM 丙磺舒的缓冲液）清洗细胞1~2次，以去除残留探针。

6） 37℃再孵育30min以保证细胞内AM的完全去酯化。

7） 用合适的激发/发射波长来检测荧光。

注意事项：

1.      荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2.      乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。

3.      Fura Red, AM在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可在20-25℃温育片刻至全部融解后使用。

4.      Fura Red, AM第一次使用，建议储存液现配现用，分装成单次用量，严格做到≤-20℃密封干燥冻存，以防止受潮。为了保证良好的实验效果，尽量在短时间内使用。

5.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

相关产品：