CoroNa Green, AM, Cell Permeant 钠离子指示探针

【温馨提示】：见我司整理的钠离子载体/探针（Sodium ionophores/indicators）产品专题。

【务必注意】：初次使用离子探针的用户，强烈建议配合：Pluronic F-127, Cell Culture Tested 细胞培养级（NBS2009-1g）一起使用，以提高探针的水溶性和胞内加载性。

产品简介：

CoroNa Green, AM是一种具细胞膜渗透性的钠离子（Na+）指示探针。一旦进入细胞后，经非特异性酯酶水解生成不具有膜渗透性的CoroNa Green，一旦与Na+结合，绿色荧光明显增强，但波长发生很少变化。与其他Na+指示探针SBFI（货号：NBS7676）和ENG-2（货号：NBS7677、货号：NBS7678）一样，当存在生理浓度的其他单价阳离子时，CoroNa Green允许从时间和空间上来选择性分辨Na+浓度的变化。分子量更小的CoroNa Green（586），相比较于其他大分子量的Na+指示探针ENG-2（1087），在同等条件下，其膜渗透性的衍生物能更好的加载进入胞内。CoroNa Green能响应更广泛的Na+浓度范围（见附图II），Kd~80mM。不同于传统的SBFI，与Na+结合后的CoroNa Green的最大吸收和发射波长分别是492nm和516nm，因此，兼容于任何能检测荧光素（Fluorescein）的仪器，包括：流式细胞仪、荧光显微镜、共聚焦显微镜、荧光酶标仪和荧光光度计。CoroNa Green是一款有价值的工具，用来分析细胞外和细胞内的钠离子水平。

产品特征：

1） 同义名：CoroNa Green acetoxymethyl (AM) ester

2） 分子量：657.62 g/mol

3） 纯度：≥90%（HPLC）

4） 外观：固体

5） 最大吸收/发射波长：492/516nm

6） 解离常数（Kd）：~80mM

7） 溶解性：DMSO

保存条件: 

-20ºC避光干燥保存，至少1年有效。

产品使用：（活细胞成像分析）

以下步骤仅做参考，具体请根据实际情况或参考文献资料来调整。

1.1 储存液准备：于实验前，将低温保存的CoroNa Green AM从冰箱取出平衡至室温（至少20min），低速离心后再开盖，直接往管内加入高质量的无水DMSO配制成1-10mM储存液，比如：往50μg CoroNa Green, AM固体（Mw：657.62）加入15μl DMSO，充分溶解后配制成5mM储存液。≤-20ºC分装干燥冻存，避免反复冻融。

1.2 工作液准备：于实验前，用生理缓冲液比如：HHBS、HBSS或无血清培养基稀释一定量的储存液，使其工作浓度在0.5-10µM，初次使用务必摸索几个梯度浓度的探针，以确认适宜的工作浓度。工作液必须现配现用。

1.3 染色步骤：

1.4 荧光检测：

注意事项：

1.       整个染色过程中需注意避光。

2.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

应用示例（来自文献，仅做参考）

文献1：

实验目的（Na+imaging）：胚胎（从桑椹胚至孵化期）用0.5µM CoroNa Green AM加载，37℃孵育30min。之后，用LSM 780共聚焦显微镜来测定胞内和/或囊胚腔的荧光强度。激发和发射波长分别是488nm和510-520nm，相同实验至少重复3次。

文献2：

实验目的（Na+imaging）：小麦种子水培10天后，暴露于150mM NaCl溶液7天。之后加入CoroNa Green AM来观察小麦根部细胞内的Na+分布。小麦根部用含探针的染色工作液（20 μM CoroNa Green AM, 5 mM KCl, 5 mM Ca2+-MES, pH 6.1）避光孵育1h。用蒸馏水清洗染色部位。使用共聚焦成像仪（激发：488nm，发射：505-525nm）来观察根部的分生组织区和成熟区。

Fig. Effects of salinity stress on Na+ and K+ homeostasis in a synthetic tetraploid wheat line and its diploid parents. (A,B) Na+ distribution in root cell indicated by CoroNa Green AM under salinity stress. (C–F) Na+ and K+ concentration. The seedlings were exposed to 150 mM NaCl for 7 days. The values are the mean (± SD) of three biological replicates. Different letters above the bar showed significant differences among wheat lines and treatments according to t-test (P < 0.05).

文献3：

实验目的（Determination of intracellular potassium, sodium, and calcium）：于检测前1h，取 2 ul 的2.5 mM CoroNa Green-AM (Na+) or PBFI-AM (K+) 储存液加入1ml细胞溶液中，使其终浓度为5 uM。于检测前30min，取4 ul的1mM Fluo-4加入1ml细胞溶液中。于37 °C, 7% CO₂ 中孵育细胞. 于流式分析前再加入PI使其工作浓度为10 ug/ml. 用装有FACSDiVa 软件的LSRII流式细胞仪进行数据分析。仅将碘化丙啶染色阴性的细胞进行相对的胞内离子浓度分析。

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