Mag-Fluo-4 AM, Cell Permeant 镁离子荧光探针

【务必注意】：初次使用离子探针的用户，强烈建议配合：Pluronic F-127, Cell Culture Tested 细胞培养级（货号：NBS2009-1g）一起使用，以提高探针的水溶性和胞内加载性。

产品简介：

具细胞膜渗透性的Mag-Fluo-4 AM是Fluo-4 AM（货号：NBS7638-50ug）的一种结构类似物，对镁离子（Mg²⁺）和钙离子（Ca²⁺）的Kd值分别是4.7mM和22µM，是一种非常有用的细胞内镁离子指示剂和低亲和性钙离子指示剂。

产品特性：

1） 同义名：Mag-Fluo-4acetoxymethyl ester,cell permeant

2） 分子式：C37H33F2NO18

3） 分子量：817.65g/mol

4） 外观：橙色固体

5） 纯度：≥90%

6） Ex/Em：494/516 nm

7） 溶解性：溶于DMSO

8）化学结构图：

保存条件: 

-20ºC干燥避光保存，至少一年有效。

产品使用：

1.储存液制备

取一管低温保存的Mag-Fluo-4 AM，置于室温回温至少20min。之后加入高质量无水DMSO配制成1~5mM储存液，比如50μg Mag-Fluo-4 AM（MW：817.65 g/mol）溶于12μl DMSO，充分溶解后，即得到5mM储存液。【注意】未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融，且要避光保存。尽快使用完。

 2.操作步骤

【注意】以下使用方法仅作参考，需根据具体的细胞类型和实验要求做出调整。加载温度范围是RT~37℃，更高温度会提高加载速度，但更低温度能最小化染料的内在化现象。表面活性剂Pluronic®F-127有时加入能促进AM探针在水溶性缓冲液内的均匀分散。

2.1 在所需温度（25℃~37℃）预孵育细胞10min，使其离子梯度达到稳定和平衡。

2.2 取4μl Mag-Fluo-4 AM储存液和5μl 20% Pluronic®F-127，加入1ml细胞培养液，剧烈漩涡混匀得到均匀的探针分散液。

2.3 取250μl上述制备的探针分散液加入750μl含细胞的培养基内，混匀，此时得到终浓度为1~5μM的工作液，根据起始母液浓度来确定。

2.4 根据需求探针孵育15~60min。

2.5 细胞清洗3次，之后继续孵育30min以保证细胞内的探针完全去酯化。之后选择合适的仪器，进行荧光测定。

应用示例（来自文献，仅用作参考）

文献一、 

使用方法（细胞内镁离子水平的流式检测）：1）用生理培养液（120 mM NaCl, 20 mM HEPES, 4.7 mM KCl, 1.2 mM KH2PO4, 1.2 mM MgSO4, 1.25 mM CaCl2, and 10 mM glucose）于37℃预孵育BMMSCs细胞10min使其达到离子梯度的稳定和平衡；2）用DMSO配制Mag-Fluo-4-AM储存液1mM；3）取4ul Mag-Fluo-4-AM储存液（1mM）和5ul 20% F-127，加入1ml培养基内，充分混匀；4）取0.25ml 分散液加入0.75ml含细胞培养液，使得探针终浓度为1uM；继续孵育30min，之后清洗细胞3次，之后再孵育30min保证细胞内AM基团的完全去酯化；5）之后用流式细胞仪分析荧光强度（Ex/em:480/520nm）。

Fig 1. MagT1 knockdown reduced intracellular Mg2+ level in BMMSCs. Intracellular Mg2+ level was significantly reduced in MagT1 knockdown BMMSCs measured by indicator Mag-Fluo-4-AM using flow cytometry.

文献二、 

使用方法（肌浆钙离子的mag-fluo-4光度测定）：趾短屈肌（FDB）肌肉纤维用Mag-Fluo-4-AM（4 µM）室温加载20min，之后用加含25 µM BTS的无探针溶液清洗20min。之后对纤维进行电刺激，用一系列抽搐刺激（1 ms pulse at 2 Hz）或5个连续性的强直电刺激。mag-fluo-4用480±15nm激发和535±30nm发射检测。

Fig 2. Measurement of mitochondrial Ca2+ uptake during twitch stimulation in mt-pericam expressing CTRL and Mfn2 KD FDB fibers. A. Average (±SE) traces of mt-pericam fluorescence (402 nm excitation/515 nm emission) in CTRL (black circles) and Mfn2 KD (white circles) fibers during twitch stimulation. B. Average (±SE) relative change in mt-pericam fluorescence (ΔF/F) in CTRL and Mfn2 KD FDB fibers during twitch stimulation. C. Representative mag-fluo-4 traces during twitch stimulation of CTRL (black trace) or Mfn2 KD (grey trace) FDB fibers. D. Average (±SE) relative change in myoplasmic mag-fluo-4 fluorescence during twitch stimulation of CTRL or Mfn2 KD FDB fibers.

注意事项：

1.      荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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