Mag-520 AM, Cell Permeant 镁离子荧光探针

【务必注意】：初次使用离子探针的用户，强烈建议配合：Pluronic F-127, Cell Culture Tested 细胞培养级（货号：NBS2009-1g）一起使用，以提高探针的水溶性和胞内加载性。

产品简介：

目前，市场上所有的镁离子荧光探针（比如：Mag-Fura-2，Mag-Indo-1，Mag-Fluo-4，Mag-Rhod-2），都是源于广受欢迎的四羧酸BAPTA钙离子螯合剂改造的三羧酸APTRA螯合剂，这类螯合剂对钙离子（Ca²⁺）的亲和性高于镁离子（Mg²⁺），通常在镁离子浓度测定的过程中造成一定的干扰：①钙离子和镁离子诱导的细胞信号通常是缠连在一起，弱选择性的镁离子探针会检测到钙离子诱导信号产生的错误结果；②生理刺激下的镁离子浓度变化往往不如钙离子显著；因此，灵敏度和选择性更高的镁离子荧光探针被期待开发。 

Mag-520正是弥补现有镁离子探针的缺陷而开发的一款新型荧光探针，能够检测浓度在0.1~10mM范围内的Mg²⁺。与现有的荧光探针比如Mag-Fluo-4相比，对Mg²⁺的亲和力比Ca²⁺高10倍。Mag-520能够用常用的488nm氩激发器来激发，发射波长是525±20nm（比如：FITC滤片设置），几乎与所有常见的荧光测定仪器兼容（见附录Fig 1. Mag-520的光谱和选择性）。

Mag-520 AM是Mag-520的一种乙酰甲酯衍生物，具有细胞膜渗透性，只需简单培养，即可轻易进入细胞。一旦进入细胞内，即被其内酯酶剪切生成不具膜渗透性的Mag-520，从而滞留在胞内以发挥相应生理功能。体外研究表明，多种细胞系（比如：HL-60）经佛司可林（Forskolin）和FCCP/CCCP刺激产生的胞内Mg²⁺变化能即刻被Mag-520 AM检测到。

核心优势（选择性更高的镁离子探针，发绿色荧光，用标准FITC滤片设置或通道检测即可）

Mag-520是传统镁离子探针（比如：Mag-Fura-2，Mag-Indo-1，Mag-Fluo-4，Mag-Rhod-2），具有更高的镁离子特异性，与现有的荧光探针比如Mag-Fluo-4相比，对Mg²⁺的亲和力比Ca²⁺高10倍（见下图）。传统的镁离子探针虽然开发用来检测镁离子，但受结构的限制性，对Ca²⁺的亲和性高于Mg²⁺。

Fig 1. Mag-520的光谱特征和选择性。A）Mag-520（10μM）在不同Mg²⁺浓度（0-100mM）下的荧光发射光谱。光谱在50mM HEPES buffer, pH 7.7的体系内测定。B）在含Mg²⁺和Ca²⁺（浓度范围：0.005~300mM）的体系内分别用Mag-520和Mag-Fluo-4在发射波长525nm（激发：490nm）下测定的荧光强度。

产品特性：

1） 同义名：Mag-520 acetoxymethyl ester

2） 分子量：579.46 g/mol

3） 外观：固体

4） 纯度：≥90%（HPLC）

5） Ex/Em：506/525 nm

6） 溶解性：溶于DMSO

保存条件: 

-20ºC干燥避光保存，至少一年有效。

产品使用：

1. 储存液制备

取一管低温保存的Mag-520 AM，置于室温回温至少20min。之后加入高质量无水DMSO配制成2~5mM储存液，比如50μg Mag-520 AM（Mw：579.46 g/mol）溶于17μl DMSO，充分溶解后，即得到5mM储存液。

【注意】未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融，且要避光保存。尽快使用完（不要超过3个月）。

2. 工作液制备

用合适的生理缓冲液或细胞培养基稀释适量Mag-520 AM母液到工作浓度，常用的2-10μM，具体的请根据自身实验需求来优化。工作液现配现用。

3. 操作步骤

【注意】以下使用方法仅作参考，需根据具体的细胞类型和实验要求做出调整。

3.1 按需培养细胞。

3.2 用合适的生理缓冲液比如：DPBS，清洗细胞。

3.3 加入适量的染色工作液覆盖细胞，于37℃培养箱内孵育15~45min。加载时间和浓度需根据自身实验要求来调整。

3.4 吸走染色工作液，用合适的生理缓冲液比如：DPBS，清洗细胞。

3.5 用合适的生理缓冲液重悬细胞。

3.6 加入刺激剂处理细胞，之后监测荧光强度变化，用流式细胞仪（530/30nm滤片，FITC通道）或带FITC滤片设置的荧光显微镜。

注意事项：

1.      荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

相关产品：