SYTOX Orange Nucleic Acid Stain (5 mM in DMSO)

死细胞橙色荧光核酸染料

产品简介：

SYTOX Orange核酸染料（SYTOX OrangeNucleic Acid Stain），是一种高亲和力的核酸染料，轻易渗透进入受损的细胞质膜，但不能穿透活细胞膜。探针只需简单孵育，使用氦氖激光器（He-Ne Laser）的543nm激光或其它520-550nm光源进行激发，死细胞的核酸则呈明亮的橙色荧光。结合以上特征，以及荧光增强＞500倍（与核酸结合）的优点，使其成为一种简单且定量的一步法死细胞指示剂，当用荧光显微镜、荧光光度计、荧光酶标板和流式细胞仪检测。与死细胞染料-碘化丙啶相比，SYTOX Orange的发射波长更短，且光谱更匹配与罗丹明滤片设置。另外，SYTOX Orange有更高的摩尔吸光系数和更大的荧光增强（与DNA结合后），这些都表明SYTOX Orange是一款更高灵敏度的死细胞染料或核复染剂。

SYTOX Orange这一死细胞核酸染料可与蓝色和绿色荧光的表面标记联合使用，用于多指标分析。也能将SYTOX Orange与任一具细胞渗透性的核酸染料比如：Hoechst 33258，用于双色标记死细胞和活细胞。

本品以DMSO储存液形式提供，浓度为5mM。只需用合适的生理缓冲液稀释到工作浓度进行简单孵育即可。适用于哺乳动物细胞、细菌和酵母菌。

产品特性：

1）同义名：SYTOX Orange dye；SYTOX Orange死细胞染料;SYTOX Orange细胞核染料;

2）外观：红色溶液

3）荧光特征：Abs/Em=547/570nm（与DNA结合）

4）渗透性：不能进入活细胞

保存条件: 

-20℃避光干燥保存，至少1年有效。

产品使用：(以下步骤仅用作示例以指导科研人员开展自身细菌样本的染色)

基于实验室经验和发表方法，建议使用广谱的染色浓度来开展使用，并且根据自身的细胞类型和实验体系来优化摸索出最佳的工作浓度（见表1）。

使用塑料管来稀释SYTOX染料，由于稀释后的染料会粘附到玻璃上。总的来说，用不含磷酸盐的缓冲液来染色能得到最好的结果。塑料或玻璃器皿上残留的去污剂也有可能影响许多细胞或有机体的真实染色，导致在含或不含细胞的溶液中都能看到发明亮荧光的材料。确保用温和去污剂来清洗玻璃器皿，用热自来水完全冲洗干净，最后用去离子水清洗数次。

①离心收集细胞，用生理盐溶液或水重悬细胞。贴壁细胞（比如：哺乳动物细胞）可能在盖玻个染料浓度，片上原位染色。使用表1内建议的工作浓度进行染色。初次实验，建议在建议浓度范围内做多,以确定能得到最佳染色的工作浓度。需要注意：生长培养基、细胞密度、是否存在其它细胞、和其它因素都可能影响染色。

②染色的真核细胞通常显示出弥散的细胞浆染色和细胞核染色，特别是经常看到明亮的核内小体染色。由于此染料具细胞膜渗透性，且中性pH下带净正电荷，也有可能染线粒体。活酵母菌内主要是线粒体染色。

注意事项：

1.      荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

应用示例：

文献1：

实验目的：SYTOX Orange是常用的核酸染料用来检测胞外陷阱（extracellular traps，ETs)。

染色对象：THP-1细胞，染色剂量：SYTOX Orange（0.6 µM）

Fig 1. eCIRP induces extracellular trap formation in THP-1 cells. (A)THP-1 cells were treated with PBS or rmCIRP (1 µg/ml) in the presence of SYTOX Orange (0.6 µM) and subjected to the time-lapse live-cell imaging immediately after the treatment with rmCIRP. The upper panel shows the cells treated with PBS without rmCIRP, and the lower panel shows the cells treated with rmCIRP at different time points. Scale bar, 100 µm. (B) The dose-dependent effect of rmCIRP was quantified by counting the cells positive to SYTOX Orange. (C) Data shows the percentage of THP-1 cells positive to SYTOX Orange at 16 h after rmCIRP treatment (n = 4–5 microscopic fields for each condition). One-way ANOVA with Turkey method: *p <0.05. (D) THP-1 cells were pre-treated with IgG isotype Abs (10 µg/ml) or anti-TLR4 Abs (10 µg/ml) for 30 min. These cells were then treated with PBS or rmCIRP (0.5 µg/ml) in the presence of SYTOX Orange (0.6 µM) and subjected to the time-lapse live-cell imaging immediately after the treatment with rmCIRP. The time-lapse live-cell imaging data were acquired up to 18 h. The representative microscopic images taken at 18 h of rmCIRP treatment are captured and shown. Scale bar, 100 µm. (E) The percentages of SYTOX Orange positive cells in various experimental groups with time are shown.

文献2：

实验目的：使用SYTOX Orange实时监测dsDNA。

实验方法：Double-stranded DNA was visualized in real time by staining with150 nM SYTOX Orange excited by a 568-nm laser (Coherent, Sapphire 568–200 CW) at 150 μW/cm2. The SSB–GFP was excited at 700 μW/cm2 with a 488 nm laser (Coherent, Sapphire 488–200 CW). Imaging was done with an EMCCD camera (Photometics, Evolve 512 Delta). The analysis was done with ImageJ using in-house built plugins. The rate of replication of a single molecule was obtained from its trajectory and calculated for each segment that has constant slope.

Fig 2. Single-molecule rolling-circle replication assays. (B) Kymograph of an individual DNA molecule undergoing leading- and lagging-strand replication. The gray indicates the fluorescence intensity of dsDNA stained by SYTOX orange.

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