MTT 噻唑兰

产品简介：

噻唑兰（Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,简称MTT，CAS：298-93-1），也称作溴化噻唑蓝四氮唑，是一种黄色染料，已经广泛替代传统的台盼蓝染色法或者放射性同位素插入法，用来检测细胞活力、细胞增殖以及毒性分析。MTT是一种可接受氢离子的化合物染料，带正电荷，具有细胞膜渗透性。活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能够将外源进入的MTT还原成为水不溶性的深蓝色MTT-甲臜结晶，而死细胞不具此功能。甲臜结晶不能穿透细胞膜，因此沉积在处于增殖且未受损伤的细胞内。甲臜结晶可用DMSO或者酸化的异丙醇溶解，酶标仪测定的570 nm吸光度能反映甲臜的生成量。而甲臜的生成量与活细胞数目成正比，因此可用来评估细胞存活状况。MTT也可用在免疫组化和免疫细胞化学研究，也可用于NAD水平检测。MTT经快速还原为甲臜后，能够螯合镍，铜和钴离子。钴螯合物可参与细胞氧化系统。

产品特性：

1）CAS NO：298-93-1

2）英文同义名：3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium Bromide;Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide;Thiazoyl blue tetrazolium bromide;

3）中文同义名：溴化噻唑蓝四氮唑；3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四氮唑噻唑蓝；

4）分子式：C18H16N5SBr

5）分子量：414.3 g/mol

6）外观：淡黄色至橙色粉末

7）纯度：≥98%

8）溶解性：溶于水（5 mg/ml）

9）化学结构图：

保存条件: 

4℃避光保存，5年有效。

产品使用：

细胞生长的培养条件会影响检测结果，因此进行MTT检测时需考虑这些条件，包括：培养时间，传代次数以及生长培养基的成分等。一般情况，48-72h培养时间下，最初铺板的细胞密度可控制在5000-10,000/孔。

【注意】：最终检测的培养液内含有酚红会严重影响检测结果。推荐MTT检测时细胞培养在无酚红环境下，也可以在进行MTT孵育的时候改用无酚红培养液。

A．储存液配制

1）MTT储存液

生化研究中，常配制成5mg/ml的储备液。MTT最好现配现用，可以称取MTT 0.5g，溶于100 mL的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤除菌，4℃避光短时间保存。建议小剂量分装放到-20℃长期保存，避免反复冻融，至少6个月有效。

2）SDS-HCl溶液（MTT终止液）

取10ml 0.01 M HCl加入1g SDS，颠倒混匀或者超声使其完全溶解，此时即为终止液。建议现配现用。

B．MTT细胞增殖检测【以96孔板为例】

1）接种细胞：用含10%胎牛血清（FBS）的培养液配制成单个细胞悬液，调整细胞密度，以每孔5000-10, 000个细胞接种到96孔板，每孔体积100µl，培养板的边缘孔用无菌PBS填充。设置空白对照孔（不含有细胞）。

2）37℃，5% CO₂，培养24-72h。

3）【可选】：对于贴壁细胞，去除旧的培养液，更换100µl/孔新鲜的培养液（不含酚红）；对于悬浮细胞，离心96孔板，去除尽可能多的上清液。然后加入100µl/孔新鲜的培养液（不含酚红）重悬细胞；

4）每孔加入10µl MTT溶液（5 mg/ml），加样时尽量勤换枪头，控制加量误差。

5）水平摇床上低速混匀1min后，放入37℃培养箱孵育4h。【注意】：对于高密度的细胞（>100,000 cells/孔）可缩短孵育时间至2h。

6）对于贴壁细胞，直接吸掉旧的培养液，避免枪尖刮破单细胞层。对于悬浮细胞，离心收集细胞，去除培养液。

7）加入100µl/孔SDS-HCl溶液，用枪充分混匀后放入37℃培养箱孵育4h。【注意】：更长的孵育时间会降低检测灵敏度。

8）孵育结束，放置在酶标仪上摇匀后，选择570nm，测定吸光度。记录结果，比色以空白调零。

【注意】：对于细胞毒性检测，以未经药物处理细胞的OD值为100%，然后计算药物处理细胞所占的比率（x），公式如下：OD（未经药物处理细胞）/OD（药物处理细胞）=100%/x。然后建立直方图。

注意事项：

1.      溶解甲臜结晶的有机溶剂具有毒性，使用时注意防护。

2.      MTT有致癌性应小心操作；MTT溶液4℃保存不可超过1周，否则会发生降解并导致检测结果错误。

3.      MTT法属于半定量检测，只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT吸光度最好在0-0.7范围内。

4.      建议用平底的酶标板来做MTT检测，仅当要求细胞生长量比较高的情况下首推组织培养级的培养板。

5.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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