Golgi-Tracker Red (BODIPY™ TR Ceramide), for live-cell imaging

高尔基体红色荧光探针（活细胞成像用）

我司提供多款高尔基体（Golgi apparatus）荧光探针:

【1】NBD C6-Ceramide【绿色荧光，适用于活细胞和固定细胞】

【2】BODIPY™TR Ceramide【红色荧光，适用于活细胞】

【3】BODIPY™FL Ceramide【绿色荧光，适用于活细胞，可能某些情况下也呈现红色荧光，取决于在细胞内的定位】

产品简介：

Golgi-Tracker Red是神经酰胺的荧光偶联物，即BODIPY™ TR标记的Ceramide（BODIPY™ TR Ceramide），选择性结合高尔基体（Golgi apparatus）Ex/Em=589/617nm，用Texas Red光学滤片设置来观察。Golgi-Tracker Red与同类型的NBD C6-ceramide相比较，表现出更好的抗光衰减性和更明亮的荧光，在很多应用上都能替代NBD C6-ceramide。Golgi-Tracker Red也能用于鞘脂运输和代谢研究，测定Schwann细胞合成脂类的速率，以及标记细胞轮廓以便在共聚焦显微镜下观察形态运动。

本产品Golgi-TrackerRed是与BSA结合后的复合物，不仅避免有机溶剂的引入，而且对活细胞呈现出更高效的高尔基体标记率。本品另提供稀释液,使用更便捷。本品适用于活细胞的高尔基体荧光标记，不适用于固定细胞。若需要做固定细胞的高尔基体染色，可选择NBD C6- ceramide（货号：NBS7694-1mg）。

Fig. Golgi-TrackerRed的激发和发射光谱图。

保存条件: 

-20ºC避光干燥保存，至少6个月有效。

产品组成：

产品使用：

1. Golgi-TrackerRed工作液的配制

① 第一次使用本品，可将Golgi-Tracker Red (0.5mM)根据单次用量分装，比如10µl/管。本品一管含30µl（总量：1mg），由于本身量微少，务必低速离心后再开盖，然后用低吸附枪头吸取母液，并分装-20℃冻存，避免反复冻融。

② 吸取少量Golgi-Tracker Red (0.5mM)按照1：100的比例用Golgi-Tracker稀释液来稀释，比如：取10µl Golgi-Tracker Red (0.5mM)加入到1ml Golgi-Tracker稀释液中，混匀后即为Golgi-TrackerRed工作液，工作液请现配现用。

【注意】：Golgi-Tracker Red的工作浓度可以根据实际情况进行适当调整，推荐的稀释比例调整范围为1:50~1:200。

2. 活细胞高尔基体的荧光标记

① 去除细胞培养液，用适量的溶液如Hanks平衡盐溶液（含钙镁）或其他缓冲液来洗涤生长在盖玻片上的细胞。

② 去除洗涤液，加入新鲜配制的Golgi-Tracker Red染色工作液，4℃孵育30min。

③ 吸走染色液，用冰浴预冷的细胞培养液洗涤细胞3次左右，换新鲜培养液37℃再孵育30min。

④ 用新鲜培养液再洗涤一次，随后用荧光显微镜或共聚焦显微镜进行观察。此时可观察到高尔基体呈明亮的强荧光染色，而细胞内的其他膜系统呈比较微弱的荧光染色。

注意事项：

1.      整个染色过程中需注意避光。

2.      Golgi-Tracker Red在4℃，冰浴等较低温度下会凝固而粘附在离心管官底、管壁或管盖内，可将置于25℃水浴温育片刻直至全部融解后使用。对于微量液体，每次使用前低速离心使得液体全部沉降至管底，再开盖使用。

3.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

染色示例【来自文献资源】

Ref 1）

实验对象：拟南芥表皮细胞（Arabidopsis Epidermal Cells）

染色目的：高尔基体染色（BODIPY TR ceramide stain for Golgi apparatus）

染色结果：

Fig 1. Subcellular Location of RGXT1-EGFP Fusion Protein in Arabidopsis Epidermal Cells after Biolistic Particle Delivery Analyzed by CLSM. (F) Fluorescence from the RGXT1-EGFP fusion protein. (G) Fluorescence from the BODIPY TR ceramide. (H) Merged images of (F) and (G) showing that the RGXT1-EGFP fusion protein colocalizes with the BODIPY TR ceramide.

Ref 2）

实验对象：外泌体（Exosomes）

染色目的：外泌体染色（Exosome staining）

染色步骤：总的来说，1 μl TR Ceramide储存液 (dissolved in DMSO, 1 mM) or 20 μl anti-CD63加入 3 × 108外泌体（200 μl），37℃孵育20min。通过外泌体纯化柱（Exosome Spin Columns）来去除未标记的染料或抗体，转到载玻片（108in 200 μl），干燥过夜，共聚焦成像分析。

Fig 2. Isolation and identification of plasma exosomes in rhesus macaques. PBMC (A) and exosomes (B) stained by BODIPY TR, or exosomes stained by CD63 (C). Exosomes were isolated from plasma, stained by BODIPY TR, and spun onto the slide. Note CD63 aggregation on the membrane of small exosome vesicles in heterogeneous size.

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