Enhanced Green Fluorescent Protein

(EGFP) 重组增强型绿色荧光蛋白  

产品简介：

绿色荧光蛋白（Green Fluorescent Protein, GFP），通常称作增强型绿色荧光蛋白（Enhanced Green Fluorescent Protein, EGFP），广泛使用的一种野生型绿色荧光蛋白（wt-GFP）变体。wt-GFP天然存在于水母（Aequorea victoria）中，1962年被Osamu Shimomura发现，鉴定为化学发光蛋白-水母发光蛋白（Aequorin）的伴侣蛋白。wt-GFP分子量为26,854.26 Da，等电点（PI）为5.80。wt-GFP具有一个次激发峰（波长：~490nm）和主激发峰（波长：395nm），两个的最大发射峰都在505nm。wt-GFP的主要特征在于普遍用于生物化学和细胞生物学领域。wt-GFP具有独特的发光特性，不依赖任何辅因子或底物，只需分子氧。因此，常将wt-GFP和目的蛋白的基因融合表达，用来监测目的蛋白表达或定位模式。

wt-GFP起初用作融合标签普遍用在许多细胞生物学应用中，但仍存在一些明显缺陷：①具有两个激发峰（如上所述），490nm激发谱更适合成像用途，但表现出低振幅的短板。②生理温度下蛋白折叠率相当低；③生色团成熟半衰期接近30min，限制了wt-GFP作为快速基因诱导的报告子。为了改进这些缺陷，分子生物学家开发出称为增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的wt-GFP变体，含Phe-64-Leu（F64L）和Ser-65-Thr（S65T）两处突变。EGFP的分子量为26,897.43 Da，等电点（PI）为5.58。以单体形式存在，与wt-GFP的二级结构相同。S65T通过调控Glu22附近的离子态抑制395nm的主激发峰，使EGFP呈现出单一激发峰增（~490nm）。F64L提高蛋白在37℃的折叠率。重要的是，EGFP的密码子序列优化后更适合在哺乳动物细胞内表达。

本品是在大肠杆菌内重组表达的非糖基化、同型二聚体蛋白。经亲和纯化所得，不仅纯度高，且荧光信号强。重组EGFP分子量为26.9kDa，由239个氨基酸构成，C端带His标签，在WB分析中可通过GFP抗体和His-tag抗体来检测。Ex/Em=488/509nm。重组EGFP是一种多用途的生物标志物，用于监测生理过程，观察蛋白定位以及检测体内转基因表达。

产品特性：

1） 同义名：Recombinant Enhanced Green Fluorescent Protein; rEGFP; recombinant EGFP;

2） 来源：大肠杆菌

3） 标签：His

4） 分子量：26.9 kDa

5） 外观：粉末

6） 纯度：≥95%（SDS-PAGE）

7） 溶解性：溶于水（1mg/ml）

8） 应用：用作GFP表达研究的对照品，包括：用作SDS-PAGE和WB分析的标准品、荧光计、流式细胞仪和荧光显微镜校准用、以及微注射进入细胞和组织等；偶联到其它蛋白上 

保存条件: 

-20ºC避光干燥保存，1年有效。

产品重溶：

将低温保存的冻干产品置于室温充分回温，低速离心到管底，之后加入无菌去离子水配制成储存液（0.5-1mg/ml），≤-20℃分装避光保存。可加入载体蛋白（比如：0.1% BSA或HSA）延长保存周期，尽量避免反复冻融次数。

【注意】：本冻干粉非无菌，若需严格无菌，可通过低蛋白吸附力的滤膜过滤除菌，再使用。

荧光活性：

注意事项：

1.      荧光染料都存在淬灭问题，操作或保存过程中尽量避光，减缓荧光淬灭。

2.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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