Dual-Luciferase® Reporter (DLRTM) Assay System (Dual_x005f[1]Luciferase® 双萤光素酶报告基因检测系统 ) 为双报告基因检测提供 有效的手段。 在 DLRTM 检测中,萤火虫 (Photinus pyralis) 萤光素酶 和海肾 (Renilla reniformis) 萤光素酶的活性可在单个样品中依次检 测。
首先检测萤火虫萤光素酶,将萤光素酶检测试剂 II(Luciferase Assay Reagent II, LAR II)加入样品中,产生的光信号至少持续1分钟。 定量萤火虫萤光强度后,再在同一个样品中加入 Stop & Glo® 试剂, 将上述反应终止,同时启动海肾萤光素酶反应。使用带有试剂自动注 射器的发光检测仪,可在 4 秒内完成两个检测。在 DLRTM 检测系统中, 两个报告基因产生的线性检测的灵敏度均可达埃摩尔级 (<10-18),在 实验宿主细胞内均无内源活性。而且,DLRTM 检测的一体化模式既可 快速定量检测转染细胞,也可用于快速定量检测无细胞转录 / 翻译反 应体系中的两个报告基因。 Promega 推荐使用针对 DLRTM 检测系统进行过确证的发光检测 仪,这些发光检测仪均带有 DLReadyTM 标识。 pGL4 萤光素酶报告基因载体是针对 DLRTM 检测系统而设计。组 成型表达的海肾萤光素酶载体可与任何实验用萤火虫萤光素酶载体联 合共转染哺乳动物细胞。
Cat.# E1960 和 E1980 产品请注意:系统中已提供了足够的 Passive Lysis Buffer,能够进行 96 孔板细胞的 1,000 次检测 ( 一 般每孔用 20μl 1X PLB)。若需要更多的 Passive Lysis Buffer( 如 >100μl/ 孔 ),可单独购买。
特点
• 准确性更高:使用海肾萤光素酶做内对照可得到更精确的结果。
• 方便:无需分开样品,可节省平板和时间。
• 灵敏:可用于研究弱启动子,低水平表达 / 调控和转染不佳的细 胞的表达。
• 线性范围:线性范围超过 7 个数量级;活性很高的样品一般无需 稀释。